BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是世界上常用的蛋白浓度检测方法之一。其原理是二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction）,

一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应.两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性,

吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。

一. 酶标仪法

1. 配制工作液：根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2. 稀释标准品：取10μL BSA标准品用PBS稀释至100μL（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/mL。将标准品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足至20μL。

3. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20μL到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4. 各孔加入200μL BCA工作液，37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二. 分光光度计法 如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。 步骤如下：

1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2. 稀释标准品：取100μL BSA标准品用PBS稀释至1mL（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/mL。

3. 取八支（或者更多）5mL离心管，标上号，按下表加入试剂。

4.37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。